LabQ RealTime PCR Kit SYBR Universal
- Allround-qPCR-Mix für den SYBR®Green-basierten Nachweis
- Optimiert für ein breites Anwendungsspektrum
- Reduziert das Risiko einer Kontamination durch PCR-Produkte
- Geeignet für alle PCR-Geräte
- 2000 rxn á 20µl (4x5ml)
LabQ RealTime PCR Kit SYBR Universal
Inklusive
- HotStart-Funktion für maximale Kontrolle über den Reaktionsstart (z. B. bei automatisierten Anwendungen).
- dUTP/dTTP-Mischung zur Ermöglichung der UNG-Verdauung (Verringerung des Risikos einer Kontamination durch PCR-Produkte).
- Universelle ROX-Konzentration, geeignet für alle PCR-Geräte.
- Zusätzliche Normalisierungsoption für Bio-Rad-Cycler.
- Verbesserte Leistung in Gegenwart eines PCR-Inhibitors.
Zusätzliche Materialien erforderlich
- Nukleasefreie PCR-Gefäße oder -Platten und passende Verschlussmöglichkeiten.
- Echtzeit-PCR-Cycler.
- PCR-Primer.
- Template-DNA und Kontroll-DNA-Standards.
- Pipettenspitzen filtern.
- Sterile, nuklease- und DNA-freie Röhrchen zur Vorbereitung des Reaktionsgemisches.
Reaktionsaufbau
Bevor Sie mit dem Reaktionsaufbau beginnen, tauen Sie das LabQ RealTime PCR Kit SYBR Universal auf und mischen Sie es gründlich, aber vorsichtig, um eine gleichmäßige Verteilung der Komponenten sicherzustellen.
Verdünnen Sie Ihre Standard-DNA und experimentellen Proben mit nukleasefreiem Wasser auf die gewünschten Konzentrationen und geben Sie sie in die dafür vorgesehenen Vertiefungen der Multi-Well-Platte.
Für die Negativkontrolle nukleasefreies Wasser hinzufügen.
Bewahren Sie die Platte bis zur weiteren Verwendung auf Eis auf.
| Komponente | Volumen | Endgültige Konzentration |
| LabQ RealTime PCR Kit SYBR Universal | 10 µl | 1x |
| Template-DNA | < 10 ng für Vorlagen mit geringer Komplexität | |
| X µl | >1 für Vorlagen mit hoher Komplexität | |
| Max. 2 µl Reverse-Transkriptionsreaktion | ||
| Vorwärtsprimer (10 µM) | 0.4 µl | Jeweils 0,05 – 0,09 µM |
| Reverse-Primer (10µM) | 0.4 µl | Jeweils 0,05 – 0,9 µM |
| Nukleasefreies dH2O | To 20 µl |
Empfohlenes qPCR-Protokoll
| Satz | Fahrräder | °C | Zeit |
| Erste Denaturierung | 1 | 95°C | 5 Minuten |
| Verstärkung | 40 | 95°C
55-60° 72°C |
10 Sekunden
15 Sekunden / 10 Sekunden 20 Sekunden |
Fügen Sie bei Bedarf einen zusätzlichen Schmelzkurvenschritt hinzu. Um eine spezifische Amplifikation sicherzustellen und mögliche Primer-Oligomere zu erkennen, wird eine Schmelzkurve empfohlen.
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